p16蛋白在肺癌组织中表达的生物学意义
作者：苏长青 叶玉坤 单祥年
单位：苏长青 叶玉坤 南京八一医院实验科(南京，210002)；单祥年 南京师范大学生命科学学院
关键词：肺肿瘤；P16蛋白；免疫组化
癌症99zk33
中图号：R734.2；R394.3；R730.23 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)s0-095-02
p16基因蛋白作用于CDK4、CyclinD1和Rb的反馈回路，通过调节Rb的蛋白活性，防止细胞过度增殖〔1〕。本文采用免疫组化技术，对肺癌组织蛋白的表达进行了研究，重点探讨p16与肺癌临床病理特征的关系。
, http://www.100md.com 1材料与方法
1.1病例资料
89例肺癌标本分别在肿瘤组织、交界处组织及其正常肺组织取材，石蜡包埋切片。取15例肺良性疾病病灶旁肺组织作为对照，包括炎性假瘤4例，结核6例，肺囊肿3例，支气管扩张症2例。
1.2免疫组化
采用SP法进行免疫组化染色。兔抗人p16抗血清和SP试剂盒购自福州迈新生物技术公司。
1.3结果判断
采用双盲法在高倍镜(×400)下计数10个视野。以染色强度和阳性细胞比例计分分级，结果以χ2检验进行统计学处理。
2结果
, 百拇医药
2.1p16蛋白表达的形态学特征
正常肺组织p16阳性见于支气管粘膜上皮、血管内皮、肺泡上皮、纤维母细胞和平滑肌细胞(图1)。肺癌细胞p16产物的表达有核型、浆型、核浆型3种分布形式，以核浆型为主(图2)。癌间质中有p16反应阳性的血管内皮、纤维母细胞和平滑肌细胞(图3)。
图1 肺组织中肺泡上皮、肺泡隔血管内皮、纤维母细胞呈P16蛋白阳性，×200
图2 肺腺癌细胞P16蛋白呈核浆型分布，间质细胞P16阳性表达，×200
, 百拇医药 图3肺腺癌细胞P16蛋白阴性，间质细胞P16阳性表达，×400
2.2肺癌与肺组织p16表达的差异
p16蛋白表达与肺癌组织学类型、分化程度、有无淋巴结转移以及临床病理分期的关系见表1。
表1 p16表达与肺癌临床病理特征的关系
组别
总例数
P16表达
丢失率(%)
-
+
++
, 百拇医药
+++
癌与非癌
肺癌
89
42
21
16
10
47.2*
交界
89
3
35
27
, http://www.100md.com
24
3.4
正常肺
89
0
29
34
26
0
良性病肺
15
0
4
6
, 百拇医药
5
0
组织学类型
鳞癌
39
22
9
6
2
56.4
腺癌
31
18
7
, http://www.100md.com
5
1
58.1
腺鳞癌
2
1
0
1
0
50.0
小细胞癌
17
1
5
, http://www.100md.com
4
7
5.9*
分化程度
高分化
29
16
7
5
1
55.2
中低分化
60
26
, 百拇医药
14
11
9
43.3
淋巴结转移
无转移
32
8
10
7
7
25.0
有转移
37
, http://www.100md.com
23
6
5
3
62.2*
临床病理分期
Ⅰ～Ⅱ期
41
14
12
8
7
34.1
, http://www.100md.com Ⅲ～Ⅳ期
48
28
9
8
3
58.3*
注：χ2检验，*P<0.05
3讨论
有关肺癌细胞p16表达的研究，已有不少文献报道〔2，3，4〕。我们采用免疫组化技术，检测了89例原发肺癌p16蛋白的表达，发现肺癌细胞p16蛋白的阳性率为528%，明显低于正常肺组织，总丢失率为472%。良性疾病肺组织中有多种细胞p16阳性，排除了良性肺疾患对p16表达的影响，因此可以肯定p16丢失是癌细胞特有的分子事件之一。采用免疫组化技术定位观察人体原发肺癌组织p16蛋白，最能反映该基因的功能状态，它能够准确区分出癌细胞和间质细胞p16蛋白表达的情况，这一点是Southernblot、Westernblot、PCR等方法无法比拟的，因为这些方法用癌组织提取基因组DNA或蛋白质进行研究，极易混入间质细胞而影响检测结果。
, http://www.100md.com
本文有关不同组织学类型肺癌p16的表达，结果与文献相同〔3〕。鳞癌、腺癌、腺鳞癌等NSCLCp16丢失明显，丢失率达569%(41/72)，而17例SCLC只有1例丢失，丢失率59%。p16蛋白的表达与癌细胞的分化无关，但与淋巴结转移和临床病理分期密切相关，随转移的发生和病程的进展，p16丢失率明显上升。有关p16与肿瘤转移和分期的关系，以及p16丢失是肿瘤的早期事件还是晚期事件，文献报道结果不一〔1，5〕。我们认为，p16表达的丢失贯穿于NSCLC发生发展的整个过程之中，不能简单地概括为早期或晚期事件。细胞一旦发生癌变，即可检出p16丢失，随着癌细胞的增殖、转移的发生和病程的进展，p16丢失加剧。因此p16在NSCLC既可作为诊断癌变的参考指标，也可被用于判断病期早晚和是否发生转移，或被用于评估预后。
基金项目：国家九五重点科技项目(攻关)计划(96-906-01-18)和国家自然科学基金(39670714)资助课题
〔参考文献〕
, 百拇医药
1 Liggett WH Jr,Sidransky D.Role of the p16 tumor suppressor gene in cancer〔 J〕 .J Clin Oncol,1998,16(3):1197.
2 Shapiro GI,Edwards CD,Kobzik L,et al.Reciprocal Rb inactivation and p16INK4 expression in primary lung cancers and cell lines〔 J〕 .Cancer Res,1995,55:505.
3 Kratzke RA,Greatens TM,Rubins JB,et al.Rb and p16INK4a expression in resected non small cell lung tumors〔 J〕 .Cancer Res,1996,56:3415.
, http://www.100md.com
4 Geradts J,Kratzke RA,Niehans GA,et al.Immunohistochemical detection of the cyclin dependent kinase inhibitor 2/multiple tumor suppressor gene 1(CDKN2/MTS1)product p16INK4A in archival human solid tumors:correlation with retinoblastoma protein expression〔 J〕 .Cancer Res,1995,55:6606.
5 Okamoto A,Hussain SP,Hagiwara K,et al.Mutations in the p16INK4/MTS1/CDKN2,p15INK4B/MTS2,and p18 genes in primary and metastatic lung cancer〔J〕 . Cancer Res,1995,55:1448.
收稿日期：1998-10-09；修回日期：1999-02-09, http://www.100md.com
单位：苏长青 叶玉坤 南京八一医院实验科(南京，210002)；单祥年 南京师范大学生命科学学院
关键词：肺肿瘤；P16蛋白；免疫组化
癌症99zk33
中图号：R734.2；R394.3；R730.23 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(1999)s0-095-02
p16基因蛋白作用于CDK4、CyclinD1和Rb的反馈回路，通过调节Rb的蛋白活性，防止细胞过度增殖〔1〕。本文采用免疫组化技术，对肺癌组织蛋白的表达进行了研究，重点探讨p16与肺癌临床病理特征的关系。
, http://www.100md.com 1材料与方法
1.1病例资料
89例肺癌标本分别在肿瘤组织、交界处组织及其正常肺组织取材，石蜡包埋切片。取15例肺良性疾病病灶旁肺组织作为对照，包括炎性假瘤4例，结核6例，肺囊肿3例，支气管扩张症2例。
1.2免疫组化
采用SP法进行免疫组化染色。兔抗人p16抗血清和SP试剂盒购自福州迈新生物技术公司。
1.3结果判断
采用双盲法在高倍镜(×400)下计数10个视野。以染色强度和阳性细胞比例计分分级，结果以χ2检验进行统计学处理。
2结果
, 百拇医药
2.1p16蛋白表达的形态学特征
正常肺组织p16阳性见于支气管粘膜上皮、血管内皮、肺泡上皮、纤维母细胞和平滑肌细胞(图1)。肺癌细胞p16产物的表达有核型、浆型、核浆型3种分布形式，以核浆型为主(图2)。癌间质中有p16反应阳性的血管内皮、纤维母细胞和平滑肌细胞(图3)。
图1 肺组织中肺泡上皮、肺泡隔血管内皮、纤维母细胞呈P16蛋白阳性，×200
图2 肺腺癌细胞P16蛋白呈核浆型分布，间质细胞P16阳性表达，×200
, 百拇医药 图3肺腺癌细胞P16蛋白阴性，间质细胞P16阳性表达，×400
2.2肺癌与肺组织p16表达的差异
p16蛋白表达与肺癌组织学类型、分化程度、有无淋巴结转移以及临床病理分期的关系见表1。
表1 p16表达与肺癌临床病理特征的关系
组别
总例数
P16表达
丢失率(%)
-
+
++
, 百拇医药
+++
癌与非癌
肺癌
89
42
21
16
10
47.2*
交界
89
3
35
27
, http://www.100md.com
24
3.4
正常肺
89
0
29
34
26
0
良性病肺
15
0
4
6
, 百拇医药
5
0
组织学类型
鳞癌
39
22
9
6
2
56.4
腺癌
31
18
7
, http://www.100md.com
5
1
58.1
腺鳞癌
2
1
0
1
0
50.0
小细胞癌
17
1
5
, http://www.100md.com
4
7
5.9*
分化程度
高分化
29
16
7
5
1
55.2
中低分化
60
26
, 百拇医药
14
11
9
43.3
淋巴结转移
无转移
32
8
10
7
7
25.0
有转移
37
, http://www.100md.com
23
6
5
3
62.2*
临床病理分期
Ⅰ～Ⅱ期
41
14
12
8
7
34.1
, http://www.100md.com Ⅲ～Ⅳ期
48
28
9
8
3
58.3*
注：χ2检验，*P<0.05
3讨论
有关肺癌细胞p16表达的研究，已有不少文献报道〔2，3，4〕。我们采用免疫组化技术，检测了89例原发肺癌p16蛋白的表达，发现肺癌细胞p16蛋白的阳性率为528%，明显低于正常肺组织，总丢失率为472%。良性疾病肺组织中有多种细胞p16阳性，排除了良性肺疾患对p16表达的影响，因此可以肯定p16丢失是癌细胞特有的分子事件之一。采用免疫组化技术定位观察人体原发肺癌组织p16蛋白，最能反映该基因的功能状态，它能够准确区分出癌细胞和间质细胞p16蛋白表达的情况，这一点是Southernblot、Westernblot、PCR等方法无法比拟的，因为这些方法用癌组织提取基因组DNA或蛋白质进行研究，极易混入间质细胞而影响检测结果。
, http://www.100md.com
本文有关不同组织学类型肺癌p16的表达，结果与文献相同〔3〕。鳞癌、腺癌、腺鳞癌等NSCLCp16丢失明显，丢失率达569%(41/72)，而17例SCLC只有1例丢失，丢失率59%。p16蛋白的表达与癌细胞的分化无关，但与淋巴结转移和临床病理分期密切相关，随转移的发生和病程的进展，p16丢失率明显上升。有关p16与肿瘤转移和分期的关系，以及p16丢失是肿瘤的早期事件还是晚期事件，文献报道结果不一〔1，5〕。我们认为，p16表达的丢失贯穿于NSCLC发生发展的整个过程之中，不能简单地概括为早期或晚期事件。细胞一旦发生癌变，即可检出p16丢失，随着癌细胞的增殖、转移的发生和病程的进展，p16丢失加剧。因此p16在NSCLC既可作为诊断癌变的参考指标，也可被用于判断病期早晚和是否发生转移，或被用于评估预后。
基金项目：国家九五重点科技项目(攻关)计划(96-906-01-18)和国家自然科学基金(39670714)资助课题
〔参考文献〕
, 百拇医药
1 Liggett WH Jr,Sidransky D.Role of the p16 tumor suppressor gene in cancer〔 J〕 .J Clin Oncol,1998,16(3):1197.
2 Shapiro GI,Edwards CD,Kobzik L,et al.Reciprocal Rb inactivation and p16INK4 expression in primary lung cancers and cell lines〔 J〕 .Cancer Res,1995,55:505.
3 Kratzke RA,Greatens TM,Rubins JB,et al.Rb and p16INK4a expression in resected non small cell lung tumors〔 J〕 .Cancer Res,1996,56:3415.
, http://www.100md.com
4 Geradts J,Kratzke RA,Niehans GA,et al.Immunohistochemical detection of the cyclin dependent kinase inhibitor 2/multiple tumor suppressor gene 1(CDKN2/MTS1)product p16INK4A in archival human solid tumors:correlation with retinoblastoma protein expression〔 J〕 .Cancer Res,1995,55:6606.
5 Okamoto A,Hussain SP,Hagiwara K,et al.Mutations in the p16INK4/MTS1/CDKN2,p15INK4B/MTS2,and p18 genes in primary and metastatic lung cancer〔J〕 . Cancer Res,1995,55:1448.
收稿日期：1998-10-09；修回日期：1999-02-09, http://www.100md.com